硝酸纤维素膜易碎，通常不能洗脱探针并重复杂交超过2~3次
●探针与膜的不可逆结合。当硝酸纤维素膜或尼龙膜干燥时间过长时，探针的结合是不可逆的。如果需要在一-张膜上杂交一个以上的探针，那么在所有的实验阶段包括杂交、洗膜以及在X射线片或磷光屏上曝光时，都必须保证所用的固相支持物保持湿润。https://www.pall.cn/content/dam/pall/pall-corp/about/about-main-image.png
●硝酸纤维素膜。结合有基因组DNA或RNA的尼龙膜可洗脱探针并重复杂交5——10次。而硝酸纤维素膜易碎，通常不能洗脱探针并重复杂交超过2——3次。
●从膜上洗去了核酸。每一次洗脱探针和重复杂交都会将固定在膜上的DNA或RNA洗去一部分，因此信号强度会逐渐降低。在这一点上， 硝酸纤维素膜是最糟糕的。
1.将数百毫升的0.05X SSC、0.01mol/L EDTA (pH 8.0)加热至沸腾以制备洗脱缓冲液。将液体从热源上移开，加入SDS至终浓度为0.1% (m/V)。
2.将膜浸入热的洗脱缓冲液中15min，在此期间请振荡或旋转容器。
3.更换新的沸腾的洗脱缓冲液，重复步骤2。
▲在更换洗脱缓冲液时注意不要让膜干燥。
4.室温下将膜浸于0.01XSSC中。将膜放在一叠纸巾上以去除大部分液体，将湿润的膜夹在两张Saran包装膜之间，用X射线片曝光以检查是否所有的探针都已被洗脱。
5.干燥膜，将其松散地包在铝箔纸或者一叠吸水纸中间，室温下保存(最好是真空条件下)直到需要时。对膜进行重复杂交时，将其置于预杂交液中，然后按照方案13步骤2进行后续实验。
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